原代細胞培養(yǎng)中常遇到的誤區(qū)

原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。原代細胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用，市場前景廣闊。

原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上，通常把第1代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。
下面由小編幫大家糾正一下原代細胞培養(yǎng)中產(chǎn)生的問題。

錯誤1：一小管原代細胞在水浴中解凍一段時間

糾正1：原代細胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養(yǎng)箱中。

錯誤2：解凍match小瓶后直接離心原代細胞

糾正2：我們不建議在解凍后離心細胞，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復(fù)原代細胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。

錯誤3：允許原代細胞變得過于融合

糾正3：當(dāng)生長至100％匯合時，原代細胞可以變得衰老。記住，原代細胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細胞的生長。我們建議在細胞達到90-95％融合時，對原代細胞進行傳代培養(yǎng)。

錯誤4：傳代原代細胞時過度胰蛋白酶消化

糾正4：當(dāng)細胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后*中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。

錯誤5：原代細胞可以很容易地重新凍存

糾正5：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代細胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細胞死亡或損傷。

錯誤6：原代細胞可以無限的增殖

糾正6：與細胞系不同，原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。