基底膜是以細(xì)胞為基礎(chǔ)的薄層細(xì)胞外基質(zhì)。康寧基質(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取的基底膜基質(zhì)，其中含有約 60%層粘連蛋白、30% IV 膠原和 8%的巢蛋白。康寧基質(zhì)膠還含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生長(zhǎng)因子、類胰島素生長(zhǎng)因子、組織纖溶酶原及其他生長(zhǎng)因子。
一、使用方法
薄層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 µl/cm2向生長(zhǎng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
3.將培養(yǎng)板放置在 37 °C ，30 分鐘。
4.如果有必要的話，請(qǐng)?jiān)谑褂脽o(wú)血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料。請(qǐng)確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
厚層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.將培養(yǎng)板放置在冰上。向康寧基底膜基質(zhì)中加入細(xì)胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮。以150-200 µl/cm2向生長(zhǎng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
3.將培養(yǎng)板放置在 37°C，30 分鐘。現(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細(xì)胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。
薄層包被法
1.依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.使用無(wú)血清培養(yǎng)基將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到需要的濃度。對(duì)于您的應(yīng)用程序，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗(yàn)為主的研究來(lái)確定您的最適包被濃度。
3.向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質(zhì)。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個(gè)小時(shí)。
4.吸出未結(jié)合的材料并使用無(wú)血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
