熱循環(huán)儀(Thermal Cycler)是一種用于進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,通過控制溫度的循環(huán)來擴(kuò)增DNA片段。Thermo Fisher Scientific提供多種型號的熱循環(huán)儀,適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求。
熱循環(huán)儀的基本原理
熱循環(huán)儀的工作原理是通過控制反應(yīng)管內(nèi)溫度的升高和降低來實(shí)現(xiàn)DNA的變性、退火和延伸過程,從而擴(kuò)增特定的DNA序列。典型的PCR反應(yīng)包括以下幾個(gè)步驟:
變性(Denaturation):高溫(通常為95℃),使雙鏈DNA分離為單鏈。
退火(Annealing):較低溫度(通常為50-65℃),引物與單鏈DNA模板結(jié)合。
延伸(Extension):中間溫度(通常為72℃),DNA聚合酶合成新的DNA鏈。
Thermo Fisher熱循環(huán)儀的主要型號
以下是Thermo Fisher Scientific幾款常見的熱循環(huán)儀型號及其特點(diǎn):
1. Applied Biosystems™ SimpliAmp™ Thermal Cycler
特點(diǎn):用戶友好、可靠性高、操作界面簡潔。
應(yīng)用:適用于常規(guī)PCR實(shí)驗(yàn)。
2. Applied Biosystems™ Veriti™ Thermal Cycler
特點(diǎn):多區(qū)溫控技術(shù),可以在一個(gè)儀器中進(jìn)行多種不同的PCR反應(yīng)。
應(yīng)用:需要優(yōu)化多種反應(yīng)條件的實(shí)驗(yàn)。
3. Applied Biosystems™ ProFlex™ PCR System
特點(diǎn):模塊化設(shè)計(jì),靈活性高,可以更換不同的模塊以適應(yīng)不同規(guī)格的PCR管和板;支持高通量應(yīng)用。
應(yīng)用:大規(guī)模、高通量PCR實(shí)驗(yàn)。
使用熱循環(huán)儀的步驟
準(zhǔn)備PCR反應(yīng)混合物 在無菌條件下,將以下試劑混合在PCR管中:
模板DNA
正向引物和反向引物
dNTPs
PCR緩沖液
MgCl2(如果緩沖液中不包含)
Taq DNA聚合酶
無菌水
設(shè)置熱循環(huán)儀參數(shù) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置以下參數(shù):
初始變性:95℃,2-5分鐘
循環(huán)參數(shù)(通常30-40個(gè)循環(huán)):
變性:95℃,30秒
退火:50-65℃,30秒(根據(jù)引物的Tm值調(diào)整)
延伸:72℃,30秒-1分鐘(根據(jù)擴(kuò)增片段的長度調(diào)整)
最終延伸:72℃,5-10分鐘
保溫:4℃
加載PCR反應(yīng)管 將PCR反應(yīng)管放入熱循環(huán)儀中,確保放置牢固。
啟動(dòng)熱循環(huán)儀 啟動(dòng)設(shè)備,選擇預(yù)設(shè)程序或手動(dòng)輸入?yún)?shù),開始PCR反應(yīng)。
監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程 反應(yīng)過程中定期監(jiān)控設(shè)備運(yùn)行情況,確保正常運(yùn)行。
分析PCR產(chǎn)物 反應(yīng)完成后,通過瓊脂糖凝膠電泳等方法分析PCR產(chǎn)物。
注意事項(xiàng)
無菌操作:確保實(shí)驗(yàn)過程中的無菌環(huán)境,避免樣品污染。
合理設(shè)置參數(shù):根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求優(yōu)化溫度和時(shí)間設(shè)置,確保PCR反應(yīng)的效率和特異性。
試劑質(zhì)量:使用高質(zhì)量的試劑,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
設(shè)備維護(hù):定期對熱循環(huán)儀進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù),確保設(shè)備的正常運(yùn)行和準(zhǔn)確性。
使用Thermo Fisher Scientific的熱循環(huán)儀可以幫助你高效地進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn),滿足各種分子生物學(xué)和基因研究的需求。