對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū),注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。
來(lái)源可靠(源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等),活力>95%,貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室,可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
服務(wù)流程:
預(yù)約登記→辦理相關(guān)手續(xù)→復(fù)蘇細(xì)胞→細(xì)胞質(zhì)量檢查→發(fā)送細(xì)胞(或自己來(lái)取細(xì)胞)→細(xì)胞售后技術(shù)咨詢答疑。
培養(yǎng)方法如下:
1、從手術(shù)室無(wú)菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后,仔細(xì)剝除腦膜、血管和纖維成分,置Hanks液中漂洗一、二次。
2、置于30—50倍體積的Hanks液中,此時(shí)腦組織比較柔軟,反復(fù)吹打即制成細(xì)胞懸液。
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后,細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)快自然下沉,脂肪等雜物易漂浮,可吸除上層、反復(fù)二、三次,即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細(xì)胞成分。
4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液,通過(guò)紗網(wǎng)成紗布過(guò)濾,計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。
5、接入培養(yǎng)瓶或皿中,置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。適應(yīng)環(huán)境過(guò)程較長(zhǎng),接種后貼壁較慢。貼壁后短期內(nèi)也可能不見(jiàn)細(xì)胞分裂現(xiàn)象,然而一旦生長(zhǎng)后即能迅速進(jìn)入旺盛的增殖狀態(tài)。細(xì)胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2.先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)(4h左右),穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),切忌在溫箱內(nèi)靜置過(guò)夜。
3.靜置后鏡檢,拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
4. 懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管內(nèi),1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min,培養(yǎng)基上清可備用,管底細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時(shí)若細(xì)胞密度超過(guò)80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)培養(yǎng);若密度未超過(guò)80%,細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),待達(dá)到80%時(shí)再正常傳代。備注:聚團(tuán)生長(zhǎng)慢,有密度依賴(lài),必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng),3天一次半量換液一次,1-2周傳代一次。
貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞密度超過(guò)80%,可正常傳代;若未超過(guò)80%,收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。備注:細(xì)胞貼壁慢,傳代后細(xì)胞放2天不動(dòng)。
5.細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4℃保存?zhèn)溆?,可補(bǔ)加2%血清。剛開(kāi)始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,一半用客戶自備的培養(yǎng)基,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。
6.因?yàn)榕囵B(yǎng)過(guò)程外因太多,所以我們的售后保障期為一周,超過(guò)一周的細(xì)胞我們會(huì)酌情處理,但不提供免費(fèi)更換服務(wù)。
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